グラム染色

グラム染色は、細菌の細胞壁構造の違いを利用し、グラム陽性菌と陰性菌を短時間で分類する基本検査である。検体を塗抹・固定し、クリスタルバイオレット、ヨウ素液、脱色、サフラニンで染色する。陽性菌は厚いペプチドグリカン層により紫色、陰性菌は赤〜ピンク色に染まる。培養・同定より早く菌の有無、形態、分類を推定でき、敗血症、肺炎、髄膜炎、尿路感染症などで初期抗菌薬選択に有用である。耐性菌を疑う手がかりとなり、不要な広域抗菌薬の抑制にも役立つ。

グラム染色の手順

1. 塗抹
   検体または培養菌をスライドガラスに薄く広げる。
2. 固定
   乾燥後、火炎固定またはメタノール固定を行い、菌をスライド上に固定する。
3. 一次染色
   クリスタルバイオレットで染色する。すべての菌が紫色に染まる。
4. 媒染
   ヨウ素液を加え、クリスタルバイオレットと複合体を形成させる。
5. 脱色
   アルコールまたはアセトンで脱色する。グラム陽性菌は紫色を保持し、グラム陰性菌は脱色される。
6. 対比染色
   サフラニンまたはフクシンで染色する。グラム陰性菌は赤〜ピンク色に染まる。
7. 鏡検
   顕微鏡で観察し、染色性、球菌・桿菌などの形態、配列、白血球の有無を確認する。